原位雜交是在分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛的實驗技術(shù)之一,是在研究生物體發(fā)育過程中的一種極為重要的分子遺傳學(xué)的研究方法。原位雜交結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物。
原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有*的敏感性,并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。
熒光原位雜交技術(shù)是一種非常有用的分子細(xì)胞遺傳學(xué)工具,特別原位雜交是對一些染色體數(shù)目異常和復(fù)雜染色體異常的診斷,架起了染色體顯帶技術(shù)和分子遺傳學(xué)之間的橋梁。本文主要就熒光原位雜交技術(shù)的發(fā)展歷程、探針制備和臨床應(yīng)用做一簡單的綜述。
在細(xì)胞遺傳學(xué),分子生物學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合基礎(chǔ)上發(fā)展的一種新科學(xué),他利用已知的核酸序列作為探針,以熒光素直接標(biāo)記或以非放射性物質(zhì)標(biāo)記后與靶DNA結(jié)合,在通過熒光素標(biāo)記,zui后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號,從而對標(biāo)本中的待測核苷酸進(jìn)行定性,定位和定量分析。
原位雜交利用DNA變性后雙鏈解開變成單鏈,在事宜的溫度和離子強度下可以退火和互補DNA鏈形成異源雙鏈的原理。