結(jié)腸癌耐藥細胞株開發(fā)涉及細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染，單細胞克隆及單克隆源性驗證，蛋白表達及結(jié)構(gòu)特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)質(zhì)的細胞株。
 

　　結(jié)腸癌耐藥細胞株廣泛用于許多重要的應(yīng)用，包括生物制品(如重組蛋白和單克隆抗體)生產(chǎn)、藥物篩選和基因功能研究。開發(fā)結(jié)腸癌耐藥細胞株的過程通常始于將所需的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至選定的宿主細胞，一般是CHO或HEK 293細胞。轉(zhuǎn)染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達的細胞克隆。
 

　　一旦檢測到這些高產(chǎn)細胞株，便進一步對這些細胞和其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進行驗證。傳統(tǒng)上用于細胞株開發(fā)的手動篩選方法耗時且需要大量勞力，因此對于此類工作，存在對高通量、自動化解決方案的巨大需求。
 

　　結(jié)腸癌耐藥細胞株穩(wěn)定整合試驗中需要考慮的幾個關(guān)鍵因素有：
 

　　1)，外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。
 

　　2)，整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
 

　　3)，整合位點的轉(zhuǎn)錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
 

　　4)，整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
 

　　5)，最好使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株，或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較，可以幫助研究人員獲得更精確的實驗數(shù)據(jù)。