蛋白質(zhì)印跡法是由瑞士*弗雷德里希生物研究所（FriedrichMiescherInstitute）的HarryTowbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（NealBurnette）于1981年所著的《分析生物化學(xué)》（AnalyticalBiochemistry）中被稱為Western Blot。

　　

　　蛋白免疫印跡即Western Blot，是將印跡技術(shù)與抗原-抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合的檢測(cè)技術(shù)，用于分離和檢測(cè)生物標(biāo)本中的某一特定蛋白。其基本原理實(shí)混合蛋白質(zhì)樣本通過凝膠電泳分離后，通過特殊虹吸或電場(chǎng)裝置印跡至固相介質(zhì)（NC膜或PVDF膜）上，將針對(duì)待測(cè)蛋白的特異性抗體作用于濾膜上，利用抗體上偶聯(lián)的酶降解底物在濾膜上生成有色沉淀物或化學(xué)發(fā)光產(chǎn)物，從而顯示出待測(cè)蛋白的存在及量。

　　

　　在Western Blot中使用內(nèi)參其實(shí)就是在WB過程中另外用內(nèi)參對(duì)應(yīng)的抗體檢測(cè)內(nèi)參，這樣在檢測(cè)目的產(chǎn)物的同時(shí)可以檢測(cè)內(nèi)參的表達(dá)，由于內(nèi)參在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，借助檢測(cè)每個(gè)樣品內(nèi)參的量就可以用于校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外使用內(nèi)參可以作為空白對(duì)照，檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否*、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

　　

　　操作程序：

　　

　　1．總蛋白制備；

　　

　　2．比色法測(cè)定蛋白含量；

　　

　　3．變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)凝膠電泳，分離蛋白質(zhì)；

　　

　　4．蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印電泳印跡法；

　　

　　5．固相免疫檢測(cè)：封閉、一抗雜交、二抗雜交；

　　

　　6．化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)：顯色、曝光、顯影定影；

　　

　　7．結(jié)果數(shù)據(jù)分析：膠片掃描，軟件分析；

　　

　　8．提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表。