原位雜交是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對標(biāo)記探針進(jìn)行探測,從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
原位雜交是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末被發(fā)明,現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域?;驹硎菬晒鈽?biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。
原位雜交技術(shù)有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢:①安全、快速、靈敏度高;②探針能較長時間保存;③多色標(biāo)記,簡單直觀;④可用于中期染色體及間期細(xì)胞的分析;⑤可應(yīng)用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標(biāo)本以及穿刺物和脫落細(xì)胞等多種物質(zhì)的檢測。