細(xì)胞凋亡檢測是用FITC標(biāo)記的重組人AnnexinV來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。細(xì)胞凋亡檢測可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅AnnexinV被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。
　　
　　一、細(xì)胞凋亡檢測：
　　
　　AnnexinV選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸。磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而AnnexinV和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
　　
　　細(xì)胞凋亡檢測用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的AnnexinV，即AnnexinV-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。本試劑盒還提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，AnnexinV-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。
　　
　　二、細(xì)胞凋亡檢測注意事項：
　　
　　盡管經(jīng)測試AnnexinV-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
　　
　　如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
　　
　　細(xì)胞凋亡檢測染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
　　
　　如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，細(xì)胞凋亡檢測需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解AnnexinV-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
　　
　　熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
　　
　　用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)AnnexinV-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將AnnexinV-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
　　
　　需自備PBS。
　　
　　本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
　　
　　為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。