人膀胱癌阿霉素耐藥株所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后,在倒置鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況。
人膀胱癌阿霉素耐藥株的傳代其操作步驟如下(斜面接種法):
(1)從冰箱冷藏室中取出菌種斜面后,應(yīng)在室溫放置約30分鐘。
(2)將裝有新鮮配制的培養(yǎng)基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期,和傳代菌種一并移入潔凈工作臺,打開紫外燈照射一小時。
?。?)關(guān)閉紫外燈。點燃酒精燈,左手握住人膀胱癌阿霉素耐藥株斜面,將管口靠近火焰上方,右手拿接種棒后端,將接種環(huán)燒紅約30秒,隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過三次。
?。?)右手用無名指、小指及掌部夾住管塞,左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,右手再輕輕拔開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷后再至菌苔上,刮取少量菌苔,隨即取出接種棒并將菌種管口移至火焰上方。
?。?)塞上管塞,左手將人膀胱癌阿霉素耐藥株放下,取營養(yǎng)瓊脂斜面一支,照上述操作打開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部向上劃一條直線,然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線,一直劃到斜面頂端,使細(xì)菌接種在斜面的表面上。
?。?)取出接種環(huán),在火焰上方將培養(yǎng)基管蓋上塞子,然后將接種過細(xì)菌的接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。
?。?)將已接種好的細(xì)菌管置30~35℃細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)22~24h,真菌管置23~28℃真菌培養(yǎng)箱zui多培養(yǎng)7天。
當(dāng)工作用人膀胱癌阿霉素耐藥株傳代代數(shù)小于5時,可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種,如:(W3)可直接轉(zhuǎn)接為(W4)。按上述程序操作,直至(W4)轉(zhuǎn)為(W5)為止,需重新接種,舊的工作菌種進(jìn)行銷毀。